組培室建設(shè)首要考慮的問題就是組培室需要哪些設(shè)備條件和需要什么樣的培養(yǎng)條件。對這些有了全面了解以后,我們便可以因地制宜地新建或利用現(xiàn)有房屋建設(shè)實驗室。在設(shè)計組培室時,一般情況應按組培的流程來設(shè)計,同時考慮人物分流順暢,空間合理利用。植物組織培養(yǎng)要求嚴格的無菌的條件,需要一定專業(yè)儀器設(shè)備、器材和用具,同時還需要人工控制溫度、光照、濕度等培養(yǎng)條件。
一個標準的組織培養(yǎng)實驗室應當包括洗滌室、配置室、接種室、培養(yǎng)室、觀察室(冷卻室)、滅菌室、洗苗室等。在實際中可結(jié)合可行條件,合并一部分。
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洗滌室完成玻璃器皿和其它儀器的清洗、干燥和貯存。室內(nèi)應配備大型水槽,用于培養(yǎng)器皿的洗滌,好是內(nèi)襯白瓷磚的水泥槽。為防止碰壞玻璃器皿,可鋪橡膠板,上下水道要暢通。備有大型塑料筐,用于放置培養(yǎng)器皿?芍苯又糜跀R架上,以節(jié)約空間和便于運輸工作。備有空干架,以空干涮凈的培養(yǎng)器皿。
。ǘ┡渲檬、滅菌室(可分開)
準備室要求明亮、通風。在準備室內(nèi)要完成培養(yǎng)基制備以及試管苗出瓶、清洗與整理工作。如果房間較多,可將準備室分為洗滌室和配置室兩部分。洗滌室專門負責試管苗出瓶與培養(yǎng)器皿的清洗工作;配置室則負責培養(yǎng)基的配制、分裝、包扎和高壓滅菌等工作。
為完成培養(yǎng)基的制備工作,準備室還應配備以下儀器設(shè)備:
1.工作臺
其高度應方便配制工作。
2.藥品柜
用以放置常用藥品。
3.普通冰箱
主要用于貯存母液、各種易變質(zhì)、易分解的化學藥品以及植物材料等。
4.電子分析天平和托盤天平
電子分析天平精確度為0.001g,用于稱取大量元素、微量元素、維生素、激素等微量藥品;托盤天平精確度為0.1g,用于稱取用量較大的糖和瓊脂等。天平應放置在干燥、不受振動的固定操作臺上。
5.純水儀或電蒸餾水器
純水儀提供純水,水質(zhì)好。電蒸餾水器, 采用硬質(zhì)玻璃或金屬制成。蒸餾水用于配制母液或培養(yǎng)基,配培養(yǎng)基可用自來水來代替,若實驗要求嚴格的話,則須用蒸餾水。
6.磁力攪拌器
磁力攪拌器用于加速攪拌難溶的物質(zhì),如各種化學物質(zhì)、瓊脂粉等 。磁力攪拌器還可加熱,使之更利于溶解。
7.恒溫水浴鍋或恒溫振蕩水浴
水浴鍋用于難溶藥品的溶解、瓊脂的溶化等。若沒有水浴鍋,也可用1500或2000W電爐或電飯鍋代替。電爐應配有鋁鍋。
8.酸度計
組織培養(yǎng)中培養(yǎng)基pH值的準確度是十分重要的,應當使用酸度計,若無酸度計,也可使用pH試紙進行粗測。首次使用酸度計前,應用標準液調(diào)節(jié)定位,然后固定。測量pH時,待測液必須充分攪拌均勻。如果培養(yǎng)基溫度過高,測量時要調(diào)整pH計上的溫度扭使之和培養(yǎng)基溫度相當。注意保護好玻璃電極,用后電極應用蒸餾水沖洗凈,蓋上電極帽。
9.培養(yǎng)基分裝設(shè)備
小型組織培養(yǎng)實驗室可采用燒杯、漏斗等作為分裝培養(yǎng)基的工具。也可采用醫(yī)用“下口杯”作為分裝工具,在“下口杯”的下口管上套一段軟膠管,加一彈簧止水夾,使用時非常合用。更大規(guī);蛞蟾蕰r,可考慮采用液體自動定量灌注設(shè)備。
10.高壓滅菌鍋
用以進行培養(yǎng)基和器械用具的滅菌。小規(guī)模實驗室可選用小型手提式高壓滅菌鍋。如果是連續(xù)的大規(guī)模生產(chǎn),應選用大型立式的或臥式的高壓滅菌鍋。通常以電作能源。
11.烘箱
用于干燥洗凈的玻璃器皿,也可用于干熱滅菌和測定干物重。用于干燥需保持80~100℃;進行干熱滅菌需保持150℃,達1~3小時;若測定干物重,則溫度應控制在80℃烘干。
12.恒溫培養(yǎng)箱
內(nèi)有溫度調(diào)節(jié)器,生化培養(yǎng)箱還配有光源,用于植物材料的培養(yǎng)。
。ㄈ┙臃N室
接種室是進行植物材料的分離接種及培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移的一個重要操作室。其無菌條件的好壞對組織培養(yǎng)成功與否起重要作用。
在工作方便的前提下,無菌操作室宜小不宜大,一般7~8m2;要求地面、天花板及四壁盡可能密閉光潔,易于清潔和消毒。無菌操作室應配置拉動門,以減少開關(guān)門時的空氣擾動。
無菌操作室要求干爽安靜,清潔明亮,在適當位置吊裝1~2盞紫外線滅菌燈,用以經(jīng)常地照射滅菌。好能安置一小型空調(diào),使室溫可控,這樣可讓門窗緊閉,減少與外界空氣對流。
無菌操作室應設(shè)有緩沖間,面積2 m2為宜。進入無菌操作室前在此更衣?lián)Q鞋,以減少進出時帶入雜菌。緩沖間好也安一盞紫外滅菌燈,用以照射滅菌。
無菌操作室的主要設(shè)備及用具有:
1.接種箱
在投資少的情況下,可以用接種箱來代替超凈臺。接種箱依靠密閉、藥劑熏蒸和紫外燈照射來保證內(nèi)部空間無菌。但操作活動受限制,準備時間長,工作效率低。
2.超凈工作臺
超凈臺的點是操作方便自如,比較舒適,工作效率高,準備時間短。開機10分鐘即可操作,可進行長時間使用。并可以保證無菌材料在轉(zhuǎn)移接種過程中不受污染。。
3.無菌操作用的器具。
按單人超凈臺上的用量計:酒精燈1個;20~25cm長的醫(yī)用鑷子1把;4號解剖刀1把,解剖刀片若干;15cm醫(yī)用剪1把;500ml廣口瓶1只,內(nèi)放酒精,現(xiàn)代專業(yè)組培室多用接種器械滅菌器和容器口滅菌器,用于浸泡鑷子、刀、剪等;用于架放灼燒過的刀、鑷子的小架。
4.擱架。
貯放高壓滅菌后等待接種的培養(yǎng)基。
(四)培養(yǎng)室
是將接種的材料進行培養(yǎng)生長的場所。培養(yǎng)室的大小可根據(jù)需要的培養(yǎng)架的大小、數(shù)目、及其它附屬設(shè)備而定。其設(shè)計以充分利用空間和節(jié)省能源為原則。高度比培養(yǎng)架略高為宜,周圍墻壁要求有絕熱防火的性能。
培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)架上培養(yǎng)。培養(yǎng)架大多由金屬制成,一般設(shè)5層,低一層離地高約10厘米,其它每層間隔30厘米左右,培養(yǎng)架即高1.8米左右。培養(yǎng)架長度,因一般在每層上端裝置日光燈,以供照明,所以都是根據(jù)日光燈的長度而設(shè)計,如采用28W日光燈,則長1.25m,21 W的長1米即可。寬度一般為50cm。
培養(yǎng)室重要的因子是溫度,一般保持在20~27℃左右,可安裝窗式或立式空調(diào)機。要求溫度因熱帶植物和寒帶植物等的種類不同而異,好不同種類有不同的培養(yǎng)室。