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植物組培培養(yǎng)和組培技術(shù)

　　植物組織培養(yǎng)是一項(xiàng)技術(shù)性強(qiáng)、無菌條件要求高的工作，在進(jìn)行植物組織培孬時(shí)，要有必要的實(shí)驗(yàn)設(shè)備條件和熟練的操作技術(shù)。

　　化學(xué)實(shí)植物組織培養(yǎng)和試管苗生產(chǎn)所使用的各種器具的洗談、干燥和保存，藥品的稱量、溶解、配制，培養(yǎng)基的分裝、包扎和滅菌，植物材料的預(yù)處理，培養(yǎng)材料的觀察分析等操作都在化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行�；瘜W(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有工作臺和存放化學(xué)助劑的藥品柜，以及放置常用玻璃器皿、試劑瓶等的器械櫥或玻璃柜。并放有烘箱、冰箱、天平、蒸餾水器、高壓滅菌鍋以及酸度計(jì)等。

　　培養(yǎng)容器的洗滌和培養(yǎng)基的滅菌，若無滅菌室和洗滌室也可在化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，但應(yīng)在房間的一角，遠(yuǎn)離天平和冰箱，而且在墻壁上設(shè)置換氣窗，以利通風(fēng)排氣，氣窗的周圍要用耐濕材料建造。如當(dāng)?shù)厮|(zhì)不良，還應(yīng)添置一臺玻璃蒸餾水器或金屬蒸餾水器，以制取蒸餾水。

　　接種室植物材料的接種、培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移、試管苗的繼代等，均需在無菌環(huán)境中進(jìn)行，無菌條件的好壞、持續(xù)時(shí)間的長短，對減輕培養(yǎng)物的污染、提高工作效率關(guān)系很大。

　　無操作室供外植體的接種、培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移和原生質(zhì)體的游離培養(yǎng)操作之用。要求用紫外光燈火菌。火菌后能長時(shí)間保持無菌狀態(tài)，以利無菌操作。無菌室地而要平坦，墻壁要光滑，采用耐水、耐藥的材料裝修，避免消毒腐蝕。除出人口和通風(fēng)囗外，均應(yīng)密封并安裝滑門，以減少與外界空氣的對流·防止外界帶菌塵埃的侵人。室內(nèi)應(yīng)盡量少放設(shè)備和器械，室內(nèi)上方和門口應(yīng)安裝紫外線燈，用于空氣及表面消毒。另外，要定期用甲醛和高錳酸鉀熏蒸用70％的酒精或0巧％笨酚噴霧降塵和消毒。使用前先用2％新潔爾滅擦洗，然后開紫外線燈照射20分鐘以上。無菌室外應(yīng)有準(zhǔn)備室，供操作人員更換工作服、工作帽和拖鞋之用，以防止帶人病菌，以保證無菌室能長時(shí)間和大量進(jìn)行無菌操作。

　　接種箱接種箱大小為長80一120厘米，寬40一厘米，高50、厘米，接種箱上面、前面及兩側(cè)均裝有玻璃，前面出人口外裝有布質(zhì)袖罩。接種箱內(nèi)裝有紫外線燈，以利經(jīng)常消毒，也可用有機(jī)玻璃制作接種箱。如無無菌室，可用接種箱代替，但必須安放在干凈、光線好的室內(nèi)。

　　超凈工作臺超凈工作臺是目前植物組織培養(yǎng)上最常用的、最普及的無菌操作裝置，與接種箱和無菌室相比，超凈工作臺既方便又舒適，無菌效果又好。它有單人、雙人及3人式的，也有開放和密封式的。超凈工作臺一般較寬，購置和設(shè)計(jì)房屋時(shí)注意'以防門太窄而搬不進(jìn)去。超凈工作臺主要是通過風(fēng)機(jī)，這人的空氣經(jīng)過細(xì)菌過濾裝置，再流過工作臺。因此，超凈工作臺應(yīng)放置在空氣干凈、地面無灰塵的地方，以延長使用期。使用過久，引起堵塞，需要清洗和更換過濾器。

　　培養(yǎng)室培養(yǎng)室是人工條件下培養(yǎng)接種物及試管苗的場所�？煞譃槠胀ㄅ囵B(yǎng)室。照明設(shè)備和控溫設(shè)備。一般要求溫度在25±2℃之間，用控溫儀

　　下保證室內(nèi)的溫度恒定在規(guī)定的范圍之內(nèi)。為了便于檢查溫度、濕度的變化情況，要放置自動(dòng)記錄溫度、濕度計(jì)。培養(yǎng)室的光源，一般采用白色熒光燈，光源通常置于培養(yǎng)物的上方或側(cè)面。有些培養(yǎng)室還設(shè)有暗室，以進(jìn)行晴培養(yǎng)獲得黃化苗等。在培養(yǎng)室里，還要放置培養(yǎng)裝置，最常見的是固體培養(yǎng)所需要的培養(yǎng)架。若要進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)，還需要有搖床、轉(zhuǎn)床等。節(jié)能培養(yǎng)室其特點(diǎn)是將配制培養(yǎng)基、接種、培養(yǎng)等步驟連貫在一起。其中實(shí)驗(yàn)室主要用來配制培養(yǎng)基，天平室除稱量藥品外，也可放置顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞學(xué)觀察；滅菌室用以進(jìn)行高壓滅菌。培養(yǎng)室窗戶要大，使光照充足，最好用雙層玻璃，以利隔熱和防塵。如果在樓房中設(shè)計(jì)組織培養(yǎng)室，則實(shí)驗(yàn)室、天平室、滅菌室可以放在中間樓道的兩邊，接種室和培養(yǎng)室在樓房的一端，不要中間走廊。

　　夏天溫度可穩(wěn)定周期25一3℃，在朝北面的培養(yǎng)室內(nèi)“，也適合試管苗的生“要。冬天可在中間的“室“。二是節(jié)約開支。節(jié)能培養(yǎng)室可充分利用自然光能，開支就大大節(jié)省了。在冬季，南北的培養(yǎng)室可以作為試管苗的冷藏室，在春、夏、秋三季，中間的培養(yǎng)室可以作為暗培養(yǎng)室進(jìn)行愈傷組織等的培養(yǎng)，或者作為培養(yǎng)無病毒植株的熱處理培養(yǎng)室，進(jìn)一步提高節(jié)能培養(yǎng)室的效益。三是試管苗的素質(zhì)好。利用自然光培養(yǎng)出的試管苗，葉色綠，生長茁壯，比人工照光培養(yǎng)的要好。

　　洗滌室植物組織培養(yǎng)對培養(yǎng)用具不僅要求質(zhì)地好，而且對其清潔工作要求較嚴(yán)格，以防止一些有毒的或其他有害化學(xué)物質(zhì)（如重金屬離子、酸堿等）對培養(yǎng)物的不利影響。因此，個(gè)有一定規(guī)模的組織培養(yǎng)室，必須有專用的洗滌室，專門供輔助人員工作和貯藏洗凈的培養(yǎng)瓶。洗滌室應(yīng)設(shè)置大的二聯(lián)洗滌池、工作臺架、玻璃瓶晾干架、放培養(yǎng)瓶的架子和箱子、大型烘箱，還應(yīng)有水箱、各種刷子等。洗滌室裝有水槽用于用具的清洗，地面要耐濕并能排水。滅菌鍋、蒸餾水器、干燥箱等可從化學(xué)實(shí)驗(yàn)室移人洗滌室，以方便操作。為節(jié)省房屋，器皿的清洗工作也可在走道上進(jìn)行。

　　細(xì)胞學(xué)觀察室在植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)過程中，隨時(shí)觀察和記錄其細(xì)胞學(xué)和形態(tài)解剖學(xué)的變化，故要進(jìn)行顯微觀察、顯微和攝影、組織切片、細(xì)胞染色等工作。因此，細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)由3個(gè)小間組成，即進(jìn)行一般操作間（切片、染色和材料準(zhǔn)備等）、顯微鏡觀察間和暗室。6，貯藏室有一間貯藏室更好。把暫時(shí)不用的器皿、用具等存放在貯藏室內(nèi)，也可以用作種質(zhì)保存。